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技術(shù)專(zhuān)題

分光光度計的在測量時(shí)應注意事項

發(fā)布日期:2014-07-08 點(diǎn)擊:2109
  吸收光譜測量發(fā)源于分析化學(xué)。利用不同的物質(zhì)具有不同的吸收峰的特性,通過(guò)吸收光譜測量可以作物質(zhì)的楊分分析;利用一定條件下溶液的濃度與其吸收度的依賴(lài)關(guān)系,通過(guò)吸收光譜測量可以作物質(zhì)的含量分析。由此看來(lái),作為吸收光譜測量基本儀器——分光光度計乃是分析化學(xué)的重要手段之一。如1.1所述,試樣的吸收度是通過(guò)內透射比計算的,而透射比是光輻射測量中的物理量之一,所以,就其本質(zhì)而言,吸收光譜測量的主要量乃是光學(xué)輻射量。分光光度計從它誕生日起,除了測量溶液之外,也測量諸如玻璃、晶體這類(lèi)的固體材料,隨著(zhù)現代工業(yè)的發(fā)展,固體試樣越來(lái)越多。國內外從事光輻射計量的實(shí)驗室先后發(fā)展基準分光光度計,復現光譜透射(吸收度)標,并開(kāi)展室際之間的量值對。
  下面分別介紹吸收光譜測量的基礎——比耳朗伯定律,與吸收測量有關(guān)的誤差源,以及測量過(guò)程中的注意事項。
2.1.1   比耳朗伯定律
     在光譜光度法中有一個(gè)重要的情況,除了規則透射能量фr以外,通過(guò)試樣之后不產(chǎn)生其它通量,而且吸收體是由無(wú)聯(lián)系的原子或分子組成的.在這種情況下,透射能量與試樣的某些通量參數之間存在一個(gè)非常重要關(guān)系式,這就是著(zhù)名的比耳朗伯(Beer-;a,bert)定律。在應用這一定律時(shí),必須已知試樣的參數,即光束通過(guò)試樣的光程長(cháng)(對于固體試樣,即試樣厚度),吸收體的濃度或摩爾吸收率。
當吸收體是無(wú)相互作用的原子或分子時(shí),比耳朗伯定律是有效的,這一條件僅僅適用于低壓下的理想氣體。實(shí)際上,比耳朗伯定律是可以成功的應用于濃度范圍相對大的稀釋溶液。在高濃度時(shí),吸收體開(kāi)始形成聚合物,從而引起摩爾吸收率的變化。比耳朗伯定律適用性的另一條件是,除了能量фr以外,其它通量為零。對準理想溶液這一條件是容易滿(mǎn)足的,但當試樣出現熒光或出現光學(xué)混濁時(shí)就不能完全滿(mǎn)足。有一些物質(zhì)明顯偏離比耳朗伯定律,這往往是不良的實(shí)驗過(guò)程或試樣條件控制不好造成的。
2.1.2  吸收度測量的誤差源
     將吸收度的測量誤差分為兩在類(lèi)考慮為宜。第一種誤差源于光譜光度計;第二種誤差直接或間接地與光度光度計的使用有關(guān)。實(shí)際上這兩種誤差是很難截然分開(kāi)的。
1.  分光光度計的局限性
首先,必須區分透射比或吸收度這兩個(gè)量的工作定義與真實(shí)透射比或真實(shí)吸收度之間的差異。
2. 反射損失
     如果試樣和參比皿的質(zhì)量很高,則外表的損失 可以忽略;在液體與熔融石英的界面上,反射損失也可忽略,因為在紫外吸收光譜測量中,溶質(zhì)的濃度是非常低的。在充水的熔融石英皿中的內反射損失,對于589.3nm波點(diǎn)僅占入射通量的0.4%。
3. 散射損失
在混濁試樣中,細小的不導電粒子會(huì )顯示出廷德?tīng)枺═yndall)散射現象,其強度正比于頻率的四次方。這會(huì )產(chǎn)生非常嚴重的問(wèn)題,特別在短波區明顯地偏離比耳-朗伯定律。有經(jīng)驗的測試人員應設法克服這種誤差

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